ATCC細胞是實驗室常用的細胞模型,被廣泛用于生物醫(yī)學研究。當從液氮或超低溫冰箱中解凍這些細胞后,為了確保細胞活性和實驗的準確性,研究人員需要執(zhí)行一系列關(guān)鍵步驟:
1.快速解凍:迅速將凍存管從冷凍環(huán)境中取出,并立即置于37℃水浴中,以最快速度解凍細胞。避免細胞在冰晶形成過程中受到損傷,防止因緩慢解凍導致的滲透壓變化損害細胞膜。
2.清潔消毒:在操作前確保工作臺面、設(shè)備和手部都已經(jīng)進行了全消毒,以避免交叉污染。使用70%乙醇對凍存管外壁進行消毒,并在無菌條件下轉(zhuǎn)移細胞。
3.離心去凍存液:解凍后立即將細胞轉(zhuǎn)移到含有適量培養(yǎng)基的離心管中,通過輕柔離心使細胞沉淀,去除含有DMSO的凍存液,因為DMSO可能對細胞產(chǎn)生毒性影響。
4.溫和重懸:丟棄上清液后,加入預熱的適當培養(yǎng)基,用移液器輕柔吹打或輕輕搖晃離心管,使細胞溫和地懸浮在培養(yǎng)基中。
5.接種細胞:將重懸的細胞接種到含有適量全培養(yǎng)基的細胞培養(yǎng)瓶或皿中,輕輕晃動容器使細胞均勻分布。
6.環(huán)境適應:將細胞置于恒定溫度的CO2培養(yǎng)箱中,允許細胞適應環(huán)境,靜置數(shù)小時,待細胞貼壁后進行檢查。
7.次日檢查:在接種后的24小時內(nèi)觀察細胞附著情況,評估存活率和生長狀態(tài)。如果有必要,更換新鮮培養(yǎng)基以提供充足營養(yǎng),同時移除死亡細胞和其他殘留物。
8.常規(guī)維護:根據(jù)細胞類型和推薦的條件,定期更換培養(yǎng)基,監(jiān)測細胞生長,并進行必要的傳代培養(yǎng)。
9.記錄與追蹤:詳細記錄解凍日期、批次、存活率、培養(yǎng)條件等重要信息,以便未來跟蹤實驗過程和結(jié)果。
10.避免污染:所有操作應在無菌條件下完成,避免細菌或真菌污染,這可能會影響實驗結(jié)果。
正確處理解凍后的ATCC細胞是實驗成功的關(guān)鍵。保持細胞活力的同時,避免污染和誤操作是保證數(shù)據(jù)可靠性和可重復性的重要前提。通過遵循上述步驟,研究人員可以確保其體外實驗的有效性,為取得準確和有意義的實驗結(jié)果打下堅實的基礎(chǔ)。